Sobrevivencia de micelio y genes asociados a la germinación no errumpente de Sclerotium cepivorum Berk

Abstract

Se determinó el tiempo que el micelio de Sclerotium cepivorum Berk. puede permanecer viable tanto en condiciones de estrés por falta de humedad in vitro, como en suelo en ausencia del hospedante. El micelio permaneció viable hasta por 123 días en cajas Petri conteniendo papa-dextrosa-agar visiblemente seco. En suelo tratado a 15 lb de presión y 120°C por 4h, en dos días consecutivos y en el tratado a 2.5 lb durante 20 min a 65°C, una sola vez, los fragmentos de micelio de S. cepivorum permanecieron viables hasta 12 y 10 días posteriores a la incorporación del mismo al suelo, respectivamente; en contraste con suelo no esterilizado ya no se detectó la presencia del patógeno en este lapso. Los resultados sugieren que el micelio de S. cepivorum posee la capacidad de sobrevivir bajo estrés por falta de humedad en condiciones in vitro, en suelo no esterilizado es incapaz de competir con la biota del suelo. Se generó una biblioteca sustractiva con los genes asociados a la germinación no errumpente de Sclerotium cepivorum. Para generar la biblioteca sustractiva se determinaron las condiciones óptimas para obtener germinación errumpente y no errumpente de esclerocios de S. cepivorum. A 22º C, el 96.7% de los esclerocios germinaron de forma no errumpente en presencia de agua, y el 91.67% de los esclerocios germinó de forma errumpente en presencia de disulfuro de alilo (DAS) al 2%. En la biblioteca sustractiva se obtuvieron 23 fragmentos de genes asociados a la germinación no errumpente de S. cepivorum. Estos genes tuvieron similitudes significativas con 15 proteínas diferentes, las cuales participan en los procesos de respiración, transcripción, traducción, transducción de señales y síntesis de aminoácidos y proteínas. Los resultados sugieren que la germinación no errumpente es más rápida que la germinación errumpente debido a un incremento en los procesos metabólicos de los esclerocios de S. cepivorum germinados de forma no errumpente.________The time that mycelium of Sclerotium cepivorum Berk. can remain viable under stress by the lack of moisture both in vitro conditions and in soil in absence of the host, was determined. Mycelium remained viable by 123 days in Petri dishes containing potato-dextrose-agar completely dehydrated. In soil treated at 15 lb pressure and 120°C for 4h, in two consecutive days (double sterilization) and in soil treated to 2.5 lb for 20 min at 65°C once (single sterilization) the fragments of mycelia of Sclerotium cepivorum Berk. remained viable for 12 and 10 days after the incorporation of the mycelia to the soil, respectively; but in non-sterilized soil the pathogen was not detected in this lapse. The results suggest that the mycelium of Sclerotium cepivorum Berk. has the capacity to survive under moisture stress in vitro conditions, but in non-sterilized soil apparently it was unable to compete with the soil biota. A subtractive library of genes associated to hyphal type of Sclerotium cepivorum was generated. In order to generate the subtractive library, optimum conditions to have eruptive and hyphal germination of S. cepivorum sclerotia were determined. At 22º C, 96.7% of sclerotia germinated hyphally in water presence and 91.67% of sclerotia germinated eruptively in presence of 2% allyl disulfide (DAS). 23 fragments of genes associated to hyphal germination of S. cepivorum were obtained in the subtractive library. Those genes had significant similarity to 15 different proteins that participate in respiration, transcription, translate, signal transduction and amino acid and protein synthesis process. The results suggest that hyphal germination is faster than eruptive germination because have an increment in the metabolic process in sclerotia of S. cepivorum germinated hyphally.