Transformación genética de cebolla (Allium cepa L.) mediante biobalística

Abstract

El objetivo de la presente investigación fue desarrollar un protocolo de transformación genética de cebolla mediante biobalística, para lo cual fue necesario establecer un sistema eficiente de regeneración de cebolla in vitro. La metodología desarrollada permite la regeneración de plantas de las variedades Cristal y El Toro. La variedad Cristal mostró mayor porcentaje de explantes con plantas y mayor número de plantas por explante. Se obtuvieron plantas después de 16 semanas de haber iniciado el cultivo y éstas formaron microbulbos, los cuales alcanzaron hasta 3 cm de diámetro cuando se transplantaron en invernadero. La respuesta in vitro obtenida superó a la reportada por otros autores. Mediante el sistema de bombardeo de alta presión, las micropartículas de tugsteno se recubrieron con el ADN del plásmido pWRG1515, cotransformando con el plásmido rdtas, el plásmido ODC y el plásmido CS. Los callos embriogénicos obtenidos pueden emplearse para incorporar transgenes a la planta de cebolla y son capaces de expresar el gen gusA después de un año y medio. La naturaleza del material transformado fue confirmada por la prueba de PCR para el gen gusA y hph siendo positiva. La obtención de plantas normales no fue posible, pero son los inicios para la transformación de cultivares de cebolla que se siembran en México._________The objective of this research was to develop a protocol for genetic transformation of onion through biobalistics; therefore, it was necessary to establish an efficient system of onion in vitro regeneration. The developed methodology allows plant regeneration for Cristal and El Toro varieties. Cristal variety showed larger percentage of explants with plants and more plants per explant. Plants were obtained after 16 weeks of culture and they formed microbulbos, which reached up to 3 cm in diameter when transplanted into greenhouse. The in vitro response obtained exceeded the one reported by other authors. For the high pressure bombardment system, tungsten microparticles were coated with pWRG1515 DNA plasmid, cotransformating with plasmid rdtas, ODC and CS plasmids. Embryogenic callus obtained can be used to incorporate transgenes to onion plants and are able to express the gusA gene after a year and a half. The nature of transformed material was confirmed by PCR tests for the gusA and hph genes and it was positive. Obtaining normal plants was not possible, but it is the beginning for transforming onion cultivars planted in Mexico.