Identificación genética de Pediococcus acidilactici de fluido ruminal y efecto de dos ionóforos en su actividad fermentativa

Abstract

Se aisló una bacteria de ovinos con acidosis ruminal usando medios selectivos para el crecimiento de bacterias productoras de ácido láctico. La bacteria fue identificada genéticamente usando una secuencia parcial de 800 nucleótidos del gen ARNr 16S obtenida por el método de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Para evaluar in vitro el efecto de los ionóforos monensina y lasalocida en la actividad metabólica de la bacteria se usó una dosis de 30 y 40 g ton-1 de Rumensin (monensina) y Bovatec (lasalocida). Tubos de cultivo con 9 mL de medio de cultivo anaerobio y 0.1 g de una dieta para ovinos alta en carbohidratos de fácil fermentación fueron inoculados con una concentración de 108 bacterias mL-1 de medio de cultivo. A las 24, 48 y 72 h de incubación se midió: pH, AGV (acetato, propionato y butirato), lactato y DIVMS. La bacteria ruminal aislada resulto un coco Gram positivo de 1.5 a 2 µm de diámetro, en pares o cadenas de cuatro células, catalasa negativo sin motilidad. De acuerdo al análisis del 16S rARN, la bacteria pertenece a la especie Pediococcus acidilactici con un 99% de semejanza. Después de 24,48 y 72 h de incubación la concentración de lactato y la DIVMS fue menor (P<0.05), y la concentración de AGV y el pH fue mayor (P<0.05) con la adición de monensina o lasalocida con respecto a los tratamientos sin ionóforos. Los ionóforos también disminuyeron el crecimiento de P. acidilactici a las 3 y 6 h de incubación. Debido a la semejanza morfológica y metabólica entre P. acidilactici y Streptococcus bovis, se sugiere realizar estudios enfocados a determinar la importancia de P. acidilactici en la incidencia y control de la acidosis ruminal._________A bacterium from lambs with rumen acidosis was isolated using selective media for growth of lactic acid-producing bacteria. This bacterium was genetically identified comparing a 800 nucleotides gen fragment of its RNAr 16S obtained by the polymerase chain reaction method (PCR). The effect of monensin and lasalocid ionophores on the bacterium metabolic activity was evaluated in vitro with 30 and 40 g ton-1 doses of Rumensin (monensin) and Bovatec (lasalocid). Culture tubes containing 9mL of anaerobic culture medium and 0.1 g of a lamb´s diet with high content of fast fermentable carbohydrates were inoculated with 108 bacteria mL-1 of culture medium. The pH, VFA (acetate, propionate and butyrate), lactate and IVDMD were measured after 24, 48 and 72 h of incubation. The isolated rumen bacterium was a Gram positive coccus, 1.5 -2.0 µm in diameter, occurs in pairs and tetrads, catalase negative and nonmotile. According with the 16S rRNA analysis, this bacterium belongs to the specie Pediococcus acidilactici with 99% of nucleotide homology. Lactate concentration and IVDMD were lower (P<0.05), and VFA concentration and pH were higher (P<0.05) with monensin or lasalocid addition than without them after 24, 48 and 72 h of incubation. The ionophores also decreased the growth of P. acidilactici after 3 and 6 h of incubation. Considering the morphology and metabolic similarities between P. acidilactici and Streptococcus bovis, it is suggested to do studies focused on the role of P. acidilactici on the incidence and control of rumen acidosis.